【Experimental Log】2015/5/6-7

6 Sample:719 (B. hayatana), 722 (B. hayatana), 705 (B. mingtsuensis), 821 (B. mingtsuensis), CP123 (B. nantoensis), CP96 (B. ravenii)

DNA extraction:CTab (測量葉片用量為719、722和705為0.1 g,其餘為0.05 g)。在65度時放入搖晃機中,約莫一小時,此次只用震盪機 (50 1/s*3 mins)*3 (一顆大、兩顆中鋼珠),開始前要將葉子先撥碎。總體積用50 (-1) ug去溶。皆有過Colum。

NanoDrop (曲老師實驗室):719 (B. hayatana)970.5(1070.8) ug/mL, 2.11(2.13) 260/280, 1.98(2.04) 260/230, 722 (B. hayatana)202.5 ug/mL, 1.82 260/280, 1.81 260/230, 705 (B. mingtsuensis)455.2 ug/mL, 2.09 260/280, 2.09 260/230, 821 (B. mingtsuensis)59.3(41.5) ug/mL,1.84(1.89) 260/280, 1.83(2.81) 260/230, CP123 (B. nantoensis)69 ug/mL, 1.83 260/280, 2.34 260/230, CP96 (B. ravenii)124.4 ug/mL, 1.85 260/280, 2.36 260/230。[除821,有些曲線波後還是有一點點雜質。]

Note:這次試了四個舊的sample,也是不同物種。這次都有抽到DNA (挑sample的技能有提升一點點)。也有抽了之前保存困難的物種,像是南投小檗(太厚)或早田氏小檗(太薄)的問題,也能知道怎樣的狀況OK。主要問題為:有幾支 (821、CP1123、CP96) 有雜質。我覺得我有點Gay敖,自以為很乾淨,在第二步過kit的colum時,WS只洗一次。(但也是擔心濃度被洗掉太多…唉,兩難。) 下次還是乖乖過兩次。突然這次的濃度有點高,而且大部分有做出來,反而又開始擔心,會不會是Nano drop壞了?還是都是汙染?實驗失敗本來就擔心,成功也要擔心,生活被實驗結果所左右,實在是很糟。要繼續加油吧。

OD260: 測DNA, RNA (核酸);OD280: 測protein;OD230: 測鹽類。OD260/OD280: 1.7~1.9,1.8為佳 (DNA);1.9~2.1,2.0為佳 (RNA),低表protein汙染。OD260/OD230: 2.0~2.4 (DNA);1.8~2.0 (RNA),低表鹽類汙染 (不要低於1.5)。

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